聚合酶链反映（PCR）扩增重组质粒的定点突变手艺是一种制备基因定点突变的经常使用方式。在定点突变进程中，常常呈现所扩增的质粒局部构成以定点突变引物为反复单位的短片断串连反复序列（VNTRs）。虽然学界对这类表示做出年夜量会商，但大都被认为是PCR扩增的假象，其背后的成因依然是一个未解之谜。哈尔滨医科年夜学医学遗传尝试室周春水传授研究小组初次对该短片断串连反复序列的发生机制给出“谜底”。相干学术功效颁发在最新一期国际期刊《进步前辈生物学》。

在制备抗衰老基因GPLD1的磷脂酶活性区点突变进程中，周春水研究小组发现，所发生的重组质粒约1/4含有以该磷脂酶突变引物对为反复单位的短片断串连反复序列，所有反复单位摆列标的目的与GPLD1基因一致，拷贝数2-13不等，而且部门反复单位毗连区伴随碱基缺掉、插入等突变环境。颠末具体排查，他们开博体育锁定了体外化学合成的突变引物对当中含有少许肇端在3’真个单链短引物（体外合成引物时的副产物），是短片断串连反复序列构成的肇端身分。

周春水研究小组在研究中发现，年夜部门短片断串连反复序列的拷贝数均在两个以上。那末，两个以上拷贝数的短片断串连反复序列又是若何构成的？

周春水传授和他的博士生胡子琪、林国超级人建立了半单位双拷贝指导法，用在重组质粒编码基因上生成短片断串连反复序列。该方式先以一条3’端肇端的半反复单位长度单链引物，指导重组质粒的肇端PCR扩增，再以一对双拷贝互补引物对（即含两拷贝反复单位），指导重组质粒的后续PCR扩增。如许的方式实行简洁，无需后续复杂的基因克隆操作，阳性质粒比率高。所生成的串连反复序列不但反复单位标的目的一致、拷贝数可变，并且反复单位毗连区之间不存在碱基突变，不会改变基因浏览框，很是合适在编码基因上生成短片断串连反复序列。

我国闻名医学遗传学家、中国工程院院士张学指出，上述研究从尝试中偶尔发现的一种有趣现象动身，提出科学问题并深切探讨份子机制，由此成立的半单位双拷贝指导法，为说明短片断串连反复序列与细胞衰老、肿瘤产生和多种神经退行性遗传疾病的关系供给了新型研究东西。同时，半单位双拷贝指导法制备短片断串连反复序列新手艺已申报国度发现专利，并获受理。

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